第十题,实验设计题。请同学们阅读一篇材料。
    核酸限制性内切酶是重组dna技术中最重要的工具酶之一,它是一类能识别双链dna中特定碱基序列,内切方式水解dna链的核酸水解酶。最适合基因工程操作的限制内切酶为第二类内切酶,这类酶的一个重要特点是切割的断裂点都在反转重复序列上,亦称回文式序列,如:
    ecor i
    5’g↓aatt c3’
    3’c ttaa↑g5’
    bamh i
    ……
    请设计一个质粒dna的限制性内切酶酶解鉴定实验。
    ‘还好我做过核酸的其他实验,这个核酸限制性内切酶的实验设计,编吧!’
    兰杰并没有亲手做过限制性内切酶的实验,他也很想做啊,然而限制内切酶是昂贵的生化试剂,教练不给他做。
    这个时候,兰杰只能依靠类似实验的操作经历及丰富的理论知识储备,进行合理的编排。
    第一步,酶切反应。
    第二步,电泳凝胶板的制备。
    第三步,电泳加样。
    第四步,电泳与鉴定。
    兰杰首先设计出四个主要的实验步骤。
    需要的实验材料包括:质粒dna、反应缓冲液、bsa、限制性内切酶……
    需要的实验器材包括:电泳槽与电泳仪、紫外检测仪、电热恒温水浴箱……
    然后就是细化每一个步骤,写出具体的实验操作细节。
    ‘设计完了,理论上应该是可行的。’
    兰杰从头到尾检查一遍试卷,刚检查完,铃声响起,交卷。
    明天将进行实验考试,雷天刚对他的队员们说:“理论考试自我感觉良好的同学,可以和我们教练团队沟通一下理论考试的情况。自我感觉一般的同学,你们回宿舍好好休息,调整状态,积极备战明天的实验考试。”
    雷天刚说罢,有一半的队员回去休息了,剩下的一半队员跟教练们对答案。
    “对对对!我是这么写的!”
    “哈哈!我又做对一题!”
    “啊?错了?”
    “又错了?”
    “第六题之后,我全错?”
    “我特么心态崩了啊!”
    ……
    在竞赛尚未全部结束的时候对答案,存在一定风险。
    自我感觉良好的同学对完答案后发现准确率较高,他们的自我感觉当然会更加良好,信心和士气倍增,有利于明日的实验赛。
    反之则炸裂。
    “这么看来,我的理论分数不会低于95分?”对完理论题的答案之后,兰杰发现他的感觉蛮准确的啊,如果能获得不低于理论分95%的分值,就非常可观。
    “而我的理论分不会高于50分,我扑街了,我不想参加实验赛了……”高二的某位队员唉声叹气,心情极为低落。
    能入选羊中生竞队的学生都是生物领域的尖子生,正常情况下,这些尖子生交了卷,在没有对答案之前,对于自己分数的估值基本上是八九不离十。
    对完答案,实际值是预期值的80%~90%,这很常见,大部分学生的估分准确率在这个区间内。
    估90分,考了30分。或者估30分,考了90分。这两种极端情况都很少见。
    羊中生竞队的这位高二学生考完了理论题,自我感觉极其良好,他自我感觉能考到90分,对完答案后发现,他的实际值有很大概率不会超过50分。
    高二的学弟还是太年轻,年轻人富于激情、持有乐观心态是好事,但被过量的激情冲昏了头脑或盲目乐观,就会伤到自己。
    兰杰劝慰道:“学弟,你读高二的时候就入选了我们羊中生竞队,来到国决赛场,已经很了不起了。你明年还有机会,并且我坚信,你明年一定会变的更强。所以你一定要振作起来,我们羊中的学生输分不输人,你必须参加明天的实验赛,这是一次宝贵的经历。你明年再来国决赛场,那就是有实战经验的老将了。”
    “兰杰学长,你讲的很对,我刚才也就是说说气话,我肯定要参加明天的实验赛。一方面是积累国决经验,另一方面,万一其他选手的实验赛发挥失常,而我超水平发挥,那我就有机会翻盘呀!”年轻人毕竟是年轻人,从乐观到悲观,再由悲观回归乐观,不过是几秒钟的事情而已。再度乐观的高二学弟并未放弃希望,他寄希望于其他选手犯错误、给机会。
    兰杰乐了:“哈哈,学弟你能这么想,可太正确了!你就等着吧,等待其他选手给机会。我相信,一定会有人给机会的。”
    学科竞赛是个人秀,主办方颁发的只有个人奖项。
    某某省或某某中学拿了几个奖,谁家的竞赛实力最强,那是非官方性质的民间统计。
    每年的生竞国决按比例颁发六七十个国一奖,平均到每个省,也就两个国一奖。
    每个省有那么多所中学、那么多个学生,所以拿到国一奖是很难很难的。
    竞争对手不仅仅只有外校或外省的学生,就说兰杰他们的羊中生竞队吧,兰杰与羊中其他同学是队友,同时也是竞争对手。
    国决又不计算团队总分,这意味着队友并没有什么价值。
    作为竞争对手,队友的价值反而更高。
    讲道理,没人愿意逆风。但因为上半场发挥的很差,不得已陷入逆风局,这也经常发生。
    逆风的选手,全都希望逆风翻盘。高二学弟是这种人,类似高二学弟的选手有不少。
    暂时处于顺风局的兰杰,他当然不会给机会让逆风方翻盘。
    次日,实验赛。
    实验赛的满分是100分,与理论赛持平。
    精神抖擞的兰杰来到指定的实验室,检查他的个人实验器材与实验试剂。
    离心机、电泳槽、制胶板(琼脂糖凝胶由主办方提前制好)、染色液、乳胶手套,移液枪4支、枪盒、质粒提取的有关试剂、拓扑异构酶(0.5u/ul)、10*loading buffer、marker dna、酶的工作液、蒸馏水……这些是兰杰的个人实验器材与实验试剂。
    公用器材是微型紫外分光光度计、水浴锅、紫外成像仪。
    实验要求选手们提取所给菌的质粒,设计实验,验证拓扑异构酶i的作用,写出简要的实验设计思路,明确说明每个体系中溶液的配比……
    这个分子生物学的实操实验,与昨天理论赛的最后一道实验设计题,有一定的相似之处啊!理论赛、实验赛是有关联的,国决的出题老师水平就是高呀。兰杰立即开始设计实验,他没有做过一模一样的实验,但在羊中的生物实验室,他做过原理相同、具体操作高度类似的实验。

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